原创《豆腐柴叶总黄酮抗氧化活性》
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摘 要：研究超声波辅助提取豆腐柴叶总黄酮及其体外抗氧化活性.结果表明：豆腐柴叶总黄酮对二苦基苯肼自由基清除率、过氧化氢清除率、总抗氧化能力及对Fe3+ 的还原能力均随质量浓度的增加而增大,其对二苦基苯肼自由基清除率及过氧化氢清除率均高于Vit C,二苦基苯肼自由基清除率在总黄酮浓度为0.4 mg/mL 时达93.01%,过氧化氢清除率在总黄酮浓度为0.04 mg/mL 时为91.18%.
关键词：豆腐柴；总黄酮；超声波；抗氧化活性
Abstract：The ultrasonic assisted extraction technology was used to extract the total flonoids fromthe Premna microphylla Turcz, then the antioxidant activity of total flonoids from the lees of beancurd wasanalyzed in vitro. The results showed that: DPPH free radical scenging, hydrogen peroxide scenging rate, totalantioxidant capacity and the reduction ability to Fe3+ increased with the increase of mass concentration. The DPPHradical scenging rate and hydrogen peroxide scenging rate were higher than those of Vit C. The scengingrate of DPPH was 93.01% when the concentration of total flonoids was 0.4 mg/mL, and the clearance rate ofhydrogen peroxide was 91.18% when the concentration of total flonoids was 0.04 mg/mL.
Key words：Premna microphylla Turcz; Total flonoids; Ultrasonic optimization; Antioxidant activity
中图分类号：TS211.4
黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌、降血糖及预防肿瘤等作用[1],豆腐柴具有显著的抗炎及预防肿瘤等功能,这可能与黄酮类化合物有关[2].目前,学者的各类研究当中,对豆腐柴叶总黄酮的总抗氧化能力及其他类型的抗氧化活性报道较少.江油豆腐柴是当地的特色旅游食品,为更好地研究该地区豆腐柴资源的生物学与功能特性,本实验使用超声波辅助提取江油豆腐柴叶总黄酮并进行其体外抗氧化活性分析,以期为江油豆腐柴资源综合开发利用提供实验依据.
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
材料：豆腐柴叶,2017 年9 月采于绵阳江油豆腐柴基地；芦丁对照品,南京替斯艾么中药研究所.试剂：二苦基苯肼基自由基（DPPH?）,SIGMAALDRICH 公司；乙醇、亚硝酸钠、钼酸铵等,均为分析纯.仪器：KH3200E 型超声波清洗器,昆山禾创超声仪器有限公司；TDL-4A 台式低速离心机,上海恰菲尔分析仪器有限公司；UV-5800PC 紫外可见分光光度计,上海元析仪器有限公司.
1.2 豆腐柴叶总黄酮的提取
工艺流程：洗净的豆腐柴叶→ 50 ℃烘干至恒重,粉碎过60 目筛→准确称取1.00 g 粉末→按照乙醇体积分数60%、料液比1 ∶ 40、超声温度70 ℃、超声时间40 min 的参数进行提取→提取液离心（4 000 r/min,10 min）→参照张丽丹等人[3] 的研究方法测定上清液吸光值,计算豆腐柴叶总黄酮的得率.
1.3 豆腐柴叶总黄酮抗氧化活性的测定
DPPH·、Fe2+ 螯合能力及总抗氧化能力的测定参考郑义等人[4] 的研究,过氧化氢清除率[5].
Fe3+ 还原能力.在刘鹏飞等人[6] 研究的基础上略作修改：在试管中依次加入2.5 mL 不同浓度的提取液,2.5 mL pH等于6.6的磷酸盐缓冲液,2.5 mL 1%铁水溶液,摇匀,50 ℃水浴反应20 min,冷却,在试管中加入10% 的Cl3CCOOH,摇匀,离心（3 800 r/min,10 min）.在试管中加入5 mL 上清液,5 mL 蒸馏水和1 mL FeCl3 水溶液,摇匀,静置5 min,在700 nm 处测定吸光值.
1.4 数据处理
实验数据由Excel 2010 处理.
2 结果与分析
由图1 可知,豆腐柴叶总黄酮及Vit C 对 DPPH·清除率都与总黄酮质量浓度呈正相关,且前者优于后者,豆腐柴叶总黄酮质量浓度达到0.4 mg/mL 时对DPPH·清除率趋于稳定,为93.01%.周劝娥等[7] 的关于陕西苦菜叶总黄酮的研究发现,在总黄酮质量浓度为0.1 mg/mL和0.7 mg/mL 时,其对DPPH·清除率分别为68.6% 和93.6%,而本次实验在总黄酮质量浓度为0.1 mg/mL 时,其对DPPH· 清除率为74.54%, 为0.5 mg/mL 时, 对DPPH·的清除率已达94.54%,由此,豆腐柴叶总黄酮对DPPH·的清除率略高于陕西苦菜叶总黄酮,故豆腐柴叶总黄酮表现出良好的抗氧化活性.
由图2 可知,豆腐柴叶总黄酮和Vit C 对H2O2 的清除率均随着总黄酮质量浓度的增加而增大,总黄酮对H2O2 的清除率始终高于Vit C.在总黄酮质量浓度低于0.04 mg/mL 时,豆腐柴圆叶总黄酮对于过氧化氢的清除率明显高于Vit C,而在总黄酮质量浓度达到0.04 mg/mL 之后,豆腐柴叶总黄酮与Vit C 对H2O2 的清除率较为接近,分别为91.18% 和89.12%.王静等[8] 对紫（白）苏叶黄酮类化合物的抗氧化活性研究发现,紫（白）苏叶黄酮分别在0.09 ～ 0.12、0.06 ～ 0.09 mg/mL,达到半数清除率.在此之后,它们对H2O2 清除率的增长速度均加快,本实验在总黄酮质量浓度为0.01 ～ 0.02 mg/mL 达到半数清除率,之后其清除率的增加速度呈较缓慢的趋势.
总抗氧化能力可作为衡量提取液体外抗氧化能力的重要指标.磷钼络合法是利用当样品溶液和钼同时存在时它们竞争被还原的原理,通过测定绿色的五价钼化合物生成量测定总抗氧化能力.由于绿色的五价钼化合物在695 nm 处有最大吸收值,故可通过测定吸光值的大小来判断物质的抗氧化能力强弱,吸光值越大则表示待测物质的抗氧化能力越强[9].由图3 可知,豆腐柴叶和Vit C 的总抗氧化能力均与质量浓度呈正相关,且Vit C 始终略高于豆腐柴叶总黄酮.在吸光值达到0.6 时,豆腐柴叶总黄酮浓度为0.26 mg/mL,与曾林晖等[10] 的蜂胶黄酮质量浓度为0.33 mg/mL 的研究相比,其总抗氧化能力较蜂胶黄酮强.
使抗氧化物质失电子变为稳定的分子可使其失去活性.Fe3+ 易得到电子,抗氧化剂可以提供电子,从而使得Fe3+ 转化为Fe2+,抗氧化剂失去电子的能力越强则表示其还原能力越强.在实验中,吸光值的大小与抗氧化物质的抗氧化能力呈正相关.将图4 中豆腐柴叶总黄酮对Fe3+ 的还原能力的曲线进行模拟得到y等于4.132 1x+0.130 8R2等于0.996 4（y 为吸光值,Abs；x 为浓度,mg/mL）,可见,其有较好的线性关系.在质量浓度为0.31 mg/mL 时,豆腐柴叶总黄酮及Vit C 对Fe3+ 具有相同的还原能力.在质量浓度低于0.31 mg/mL时,Vit C 对Fe3+ 的还原能力较强,在质量浓度高于0.31 mg/mL 时,二者趋于一致.本实验与段宙位[11] 得出的沉香叶黄酮类化合物对Fe3+ 的还原能力经线性回归后符合线性分布的结论一致.
金属离子会对人体造成损害,加入抗氧化物质可使金属离子发生螯合作用,从而减少其对于细胞的伤害,进而达到保护生物机体的作用[12].Fe2+ 的螯合程度越大,物质的抗氧化能力越强.由图5 可知,豆腐柴叶总黄酮和Vit C 对金属铁离子的螯合率随浓度的增大呈上升趋势,豆腐柴叶总黄酮的趋势较为平缓,Vit C 上升幅度较大,但在相同的豆腐柴叶总黄酮质量浓度的条件下,豆腐柴叶总黄酮提取液对于Fe2+ 螯合率高于Vit C.
3 结语
豆腐柴叶总黄酮具有较好的抗氧化活性,且随着质量浓度的增加而增大,其中对DPPH·清除率的半数抑制浓度IC50等于0.070 mg/mL,过氧化氢清除率的半数抑制浓度IC50等于0.011 mg/mL,对Fe3+ 还原能力及Fe2+ 螯合能力均有较好的线性关系,使用超声波提取的豆腐柴叶总黄酮的总抗氧化能力较强.
参考文献:
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基金项目： 四川省科技厅项目“ 江油市豆腐柴种植与综合开发利用技术及示范”（ 编号：2017NFP0178）.
作者简介：曾奕秀（1995—）,女；专业方向为功能性食品.
通信作者：熊双丽（1977—）,女,硕士生导师；专业方向为功能性食品加工与安全.
抗氧化论文参考资料：
上文结束语，本文论述了关于总黄酮和抗氧化和豆腐方面的相关大学硕士和抗氧化本科毕业论文以及相关抗氧化论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料。
