原创《现场快速检测技术进展》
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人们生活水平日益提高,对食品安全的关注愈发强烈,2011年央视双汇“”事件后,对“”的专项整治工作推到一个前所未有的高度.“”是β肾上腺受体激动剂类化合物的统称,包括盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等10余种物质,用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病,有促生长、减少脂肪含量、提高瘦肉率等功效.食用含有“”的食物对人体有害,主要危害是出现肌肉震颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状,对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,可导致死亡.
使用“”属于违法行为,世界各国法规禁止将“”用于畜禽养殖,因“”低廉、效果显著,有不法分子铤而走险,使用“”的新闻报道依然出现.如何快速准确的检测“”成分,通过现场检测快速筛查成为一项重要的监督手段.本文将对“”现场快速检测技术进行综述.
1 “”现场快速检测的概念
短时间内出具体检测结果的行为称之为快速检测,“”现场快速检测技术主要是通过现场收集动物尿液（猪尿、牛尿、羊尿）,不需要样品前处理,利用快速检测试纸条进行检测.
2 “”现场快速检测的意义
“”现场快速检测是监管人员的重要监督手段,能在现场及时发现可疑问题,迅速采取措施,大大提高监督工作效率,对保障食品安全有着重要意义.“”现场快速检测能够提高实验室检测的针对性及准确率,能够快速筛查出可疑样品,有针对性的采集样品,既能提高监督效率,提升实验室工作效率,又能降低实验室样品检测费用.“”现场快速检测是实验室常规检测的有益补充.实验室受限于仪器设备、人员、时间等因素,对样品检测数量、速度有极大的限制,利用现场快速检测,增加样品检测数量,扩大食品安全控制范围.现场快速检测出阳性的样品送实验室进一步检测,既能提高监督覆盖面,又减轻了实验室的工作压力.
3 “”现场快速检测技术种类
“”现场快速检测技术主要为免疫层析技术,包括胶体金免疫层析技术和荧光微球免疫层析技术.
3.1 胶体金免疫层析技术
免疫层析技术是出现于20世纪80年代初期的一种独特的免疫分析方式,以条状纤维层析材料为固相,通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动,通过抗原抗体结合的免疫反应原理,层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测线）,通过酶反应或直接运用可目测的标记物（如胶体金）而得到直观的实验结果（如检测线出现不同颜色的条带）；游离标记物越过检测线,达到与结合标记物自动分离之目的.免疫层析技术常见的目测标记载体有胶体金、乳胶、胶体硒等,运用最成功的标记物为胶体金.
目前,所建立的胶体金免疫层析检测法存在缺陷.胶体金免疫层析法中,当标记物胶体金颗粒集聚到一定量时,能观察到胶体金的红色条带,检测灵敏度低,难以达到国家要求.不同的材料基质效应明显,样本背景干扰较大,易产生假阳性结果.采用肉眼判读,当检测线显色比较模糊时,可能引起误判或漏判,检测结果难以保存.结果没有数据显示且不能与物联网相结合,所测结果难以进入国家食品安全数据库.
市面上检测的胶体金检测卡大致可以分为两类：一类是定性检测,其中基于消线法判断的检测卡一般灵敏度为2～5p pb,基于比色法判断的检测卡灵敏度为1～2p p b；一类是定量检测卡,定量检测范围在0.3～10p p b,I C50为0.5～1p p b.定量检测需要通过小型的胶体金读取仪进行结果读取.胶体金检测卡的特点是单份测定、简单、快速、不需任何仪器设备、用肉眼观察结果、经济实用、容易被基层掌握并大面积推广.检验实践中,胶体金检测卡被广泛应用于基层大量的筛查工作.
3.2 荧光微球免疫层析技术
荧光微球是直径为0.01～
10微米的采用较长荧光半衰期的稀土离子作为标记物来制备的包裹荧光物质的微球,表面连接有活性基团,荧光过程是主动的过程,荧光强度依赖于供能的强度,即样品荧光信号强度与激发信号强度成正比,采用高强度的光源可增强荧光物质的灵敏度.再加上在二氧化硅纳米微球中掺杂了量子产率较高的荧光染料,产生比胶体金大10倍以上的光信号,提高了检测灵敏度.荧光微球提供了化学和机械稳定性的保护屏障,减少所掺杂染料受到外界环境的干扰,提高光稳定性,不易被光降解或漂白.比胶体金显色更稳定.对二氧化硅纳米荧光微球表面进行修饰,通过共价键与抗体结合,比胶体金与抗体的物理吸附法更稳定.二氧化硅纳米荧光微球显色稳定,不会随着粒径变化而改变.荧光微球试纸条对动物血液和尿液等基质有较强的抗干扰性能.目前,市面上的荧光微球定量免疫层析检测卡检测范围为0.05～5ppb,IC50为0.1～0.pb.
4 “”现场快速检测在研技术
“”现场快速检测在研技术主要是时间分辨免疫层析检测技术.时间分辨荧光微球基于镧系元素［如Eu（III）］标记物制备的,时间分辨荧光免疫方法与传统荧光分析方法相比具有独特的优势.时间分辨指在延迟时间的帮助下区分有用的荧光信号和非特异性背景荧光.具有更大的斯托克斯位移（超过150纳米）和更长的荧光寿命（长达1毫秒）的镧系元素标记的时间分辨荧光免疫测定可以减少非特异性荧光信号的干扰,获得高灵敏度.时间分辨免疫层析试纸条在定量检测时具有优势.实验结果表明,该方法具有最低的L O D、最宽的线性范围、最少的抗体探针和抗原用量和最短的检测时间.确证分析该试纸条的检测结果与商业ELISA试剂盒和LC～M S/M S分析结果具有显著的相关性和一致性,表明该检测方法的可靠性.食品安全领域,时间分辨免疫层析试纸条作为免疫层析方法中的新型标记物有广泛的应用价值.该试纸条的检测需要使用时间分辨荧光读取仪进行结果读取.
5 前景展望
胶体金检测试纸条操作简单、快速、不用任何仪器设备、肉眼即可观察结果以及较高性价比等特点被基层现场快速检测工作中大量使用,受环境、温度、人员操作等因素影响较大,易产生假阴性、假阳性甚至失效.结果的稳定性不够决定了胶体金试纸条只可应用于初步大范围大面积的筛查工作,无法推广应用到更深层次.荧光微球免疫层析技术稳定性、抗干扰性、结果准确率均要好于胶体金免疫层析技术,其操作复杂、结果读取不便、成本较高等因素,导致在基层推广应用不利,在保证稳定性、结果准确率的基础上进一步优化技术、控制成本,可进一步进行推广普及.时间分辨免疫层析技术可媲美商业EL I SA试剂盒和L C～M S/M S分析结果的稳定性、准确性、灵敏度等优点,将成为定量检测“”成分的独特优势.
综上所述,现有“”现场快速检测技术的日益成熟,“”大量筛查工作中发挥的作用不容小觑.但“”现场快速检测技术仍需进一步提升,市场上仍需稳定性高、抗干扰性高、结果准确率高、性价比高的检测技术出现.
检测技术论文参考资料：
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